提供商:             上海研謹(jǐn)生物
服務(wù)名稱:          石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光
規(guī)格:               實(shí)驗(yàn)服務(wù)
周期：             1-2周
價(jià)格：             15元
 
收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
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石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光
 
 
TUNEL凋亡熒光實(shí)驗(yàn)原理
dUTP缺口末端標(biāo)記(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling，TUNEL) 法檢測細(xì)胞凋亡的原理是當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí),DNA內(nèi)切酶被激活，核小體間的基因組DNA被切斷，暴露的3-0H可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TerminalDeoxynucleotidyl Transferase, TdT)加上帶有熒光素FITC標(biāo)記的dUTP,從而可以通過熒光顯微鏡進(jìn)行檢測。
 
TUNEL凋亡熒光實(shí)驗(yàn)意義
1.TUNEL法是一種分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法，可對完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞或者凋亡小體進(jìn)行原位染色，可以準(zhǔn)確反映細(xì)胞凋亡最典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征。
2.可用于石蠟切片、冰凍切片、培養(yǎng)的細(xì)胞等進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測，靈敏度遠(yuǎn)比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)方法要高。
3.操作簡便快捷，在細(xì)胞凋亡的研究中被廣泛采用。
 
TUNEL凋亡熒光實(shí)驗(yàn)步驟:
1.石蠟切片TUNEL顯色法:
①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水，脫蠟劑= =甲苯，至水劑乙醇;
②PBS漂洗3*5 min; .
③加入蛋白酶K工作液379C反應(yīng)15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
④4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液，其中含有TdT酶、熒光標(biāo)記液、TUNEL檢測液;
⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液，37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核;
⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察。
 
2.冰凍切片TUNEL顯色法:
①新鮮組織經(jīng)處理后，立即在恒冷冰凍切片機(jī)內(nèi)切片，厚度為5~6 um;
②防脫玻片，貼片，室溫陰干約12h;③4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定10 min,
PBS漂洗3x5 min;
④浸入封閉液(3%H20O2) 室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;
⑤浸入通透液(0.1%Triton X-100溶于PBS中)，室溫通透30 S-2 min;
⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液，其中含有TdT酶、熒光標(biāo)記液、TUNEL檢測液;
⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液，37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;
⑧選擇是否用DAPI復(fù)染細(xì)胞核:
⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進(jìn)行觀察。
 
結(jié)果展示
 
 
 
 
實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
1.實(shí)驗(yàn)周期: 1-2周
2.交付標(biāo)準(zhǔn):蠟塊、切片、染色圖片.實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟、試劑、耗材等)
 
需確認(rèn)的信息
1.樣本的種屬
2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)
3.是否提供試劑盒
4.拍照要求
 
從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!
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