免疫組化試劑盒使用說明書

保存方法：2-8℃保存。     有效期：一年。     生產(chǎn)日期：見封口。

工作原理：

辣根過氧化物酶（HRP）的分子量（40000），它不會(huì)遮蓋抗原的結(jié)合部位，具有較高活性及特異性，可溶性佳，生成的產(chǎn)物不擴(kuò)散，可作用于多種底物，產(chǎn)生不同顏色且HRP穿透力強(qiáng)，易進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。DAB在 H2O2存在的情況下，可以作為HRP的電子供體，產(chǎn)生褐色的不溶顆粒，可作為顯色的試劑。

試劑盒內(nèi)容：

自備試劑：無水乙醇、蘇木素。

操作步驟：

1. 60℃常規(guī)脫蠟至水后，將石蠟切片先后浸入二甲本苯Ⅰ，二甲本苯Ⅱ各10min。然后逐級(jí)降濃度酒精入水，每次3-5 min。

2.熱修復(fù)抗原： 將切片置于0.01mol/L pH6.0枸櫞鈉緩沖液，微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5-10 min后，反復(fù)1-2 次，置于室溫自然冷卻。0.01 mol/L  pH6.0的PBS洗滌3次，每次5 min

3.消除內(nèi)源性過氧化物酶：用3% H ₂ O ₂ 室溫孵育 5-10 min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次，每次5 min；

4.滴加一抗： 滴加適當(dāng)稀釋的一抗到切片上，37℃孵育1小時(shí)左右或者4℃過夜， pH7.4的PBS洗滌3次，每次5 min 。（一抗的稀釋度、孵育時(shí)間和溫度與染色強(qiáng)度、背景有直接關(guān)系。一般來說，陽性染色強(qiáng)度不夠時(shí)，可提高一抗?jié)舛群脱娱L孵育時(shí)間；背景過高時(shí)，可降低一抗?jié)舛群涂s短孵育時(shí)間。）

5.加入廣譜二抗，37℃孵育1小時(shí)，取出后PBS洗滌3次，每次5 min。

6.DAB顯色： 取DAB顯色液I及II各50微升加至入1mL的水中，配成DAB工作液，滴加到切片上，室溫顯色，鏡下控制反應(yīng)時(shí)間。若無背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。蒸餾水充分洗滌以終止反應(yīng)。

7..觀察顯色后自來水沖，蘇木目精復(fù)染1-2min，，自來水沖10min，梯度酒精脫水，二甲本苯透明，中性樹膠封片，干燥，分析拍照